增菌培養物實驗樣品鏡檢高倍光學顯微鏡
增菌培養物,按以下步驟進行操作。
(1)涂片 取一接種環上述培養物涂布于潔凈載玻片上,并在左上
角編號,室溫干燥。
(2)加沙門氏菌多價O血清和桿菌肽 上述玻片標本上各滴加沙門
氏菌多價O血清工作稀釋液1滴,立即加入1滴桿菌肽溶液
鏡檢與結果
上述玻片標本,以高倍顯微鏡觀察結果。在檢樣中如有沙門氏菌
存在,菌形呈紡錘形,其大小比原菌大2~4倍,以橫徑膨脹更為明顯
。菌體呈鮮艷藍色,有些菌體為兩極濃染。菌體壁變薄,有扁平感,
失去很強的折光性。視野中未發現免疫染色特征的菌株者,被檢樣品
中未發現沙門氏菌。對比沙門氏菌使用免疫染色法處理的標本,具有
免疫染色的特征,非沙門氏菌的對比免疫染色,無此特征。普通染色
液染色的沙門氏菌,具有該染色液染色的特征,菌體刁;膨脹,體壁
與折光性無異常。
熒光抗體法
主要儀器和試劑
(1)顯微鏡玻片 無自發熒光,厚度0.8~1.2mm,在玻片的一面
刻有號碼及8個方格(上下兩列,每列:格)。每次使用前,必須用洗滌
劑徹底除盡油污,并擦洗干凈,經滴水檢查,確實無油污后方可使用
。
(2)熒光顯微鏡 熒光顯微鏡由電器和燈室兩部分組成,油浸暗視
野集光器系統。國產有超高壓汞燈熒光光源裝置和高色溫溴鎢燈熒光
顯微光源裝置,配有一架普通顯微鏡即可使用。
熒光抗體試劑必須低溫保存(4℃左右),稀釋后的試劑,應分成小
批,冰凍貯存。在每批試劑首次使用前,或稀釋并存放較長時間后,
應用幾個不同抗原的已知沙門氏菌測定試劑的效價,并確定或校正其
工作滴度。染色效價,即能使所染菌株呈4+熒光強度的最大稀釋倍數
,低于染色效價一個滴度的試劑稀釋倍數,為其工作淌度。